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配置缓冲液的方法与技巧

更新时间:2023-08-29   点击次数:1799次

今天,艾伟拓团队要向您推荐一款操作简便且复现性较好的缓冲液配制方法:
使用氨丁三醇(Tris)及盐酸氨丁三醇(Tris-HCl)固体粉末进行配制。
Tris缓冲体系被广泛应用生物制剂研发与生产过程中,例如目前已上市的两款mRNA xin'guan疫苗均选用Tris/Tris-HCl作为其制剂缓冲体系,此外该缓冲体系还广泛用于抗体蛋白纯化等生物制剂生产环节。
使用时,可根据目标浓度及pH,计算并直接称取两种固体粉末混合,溶解定容,至于两种固体粉末的用量如何确认,您可以参考以下实验步骤以及艾伟拓实验室实测值,通过一个简单的预实验进行确认:
1. 分别配制目标浓度的Tris与Tris-HCl(这里以0.1mol/L为例)


2.两种溶液分别取不同体积混合成相同体积(这里以100mL为例)的缓冲液,测定溶液pH
待摸索出两种溶液适宜比例后,根据计划配置的缓冲液体积,倒算两种固体粉末的用量。

基于该方法,我们复现了Moderna的新冠mRNA疫苗中的Tris缓冲溶液,pH理论值为7~8,实测值为7.47(注:该实测值为溶液中仅包含Tris/Tris-HCl,不含mRNA-LNP及其他辅料情况下的pH值)。

该方法的优势是操作简便,只需称取及溶解两步,在外界温度及溶液浓度相同的情况下,复现性较好,且无需使用浓盐酸等严格受限的试剂。

使用该方法配置Tris/Tris-HCl缓冲液的注意事项如下:
①浓度及温度对Tris缓冲液pH均有较大影响,建议做上述实验时,保持与实际使用场景相同的温度与浓度,并在配置完成后第一时间进行测量,避免二氧化碳的干扰。

②若变更使用浓度或环境温度,需重新进行上述实验。

③为避免Tris-HCl含量波动等因素造成配置的缓冲液pH不稳定,建议采购质量可靠的药用级Tris及Tris-HCl产品。
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