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影响阳离子脂质材料转染效率的常见因素

发布时间:2022-06-07   点击次数:20次
  阳离子脂质材料在经转染和表达过程中,有诸多因素均会影响表达效率,如细胞所处的周期、脂质体与质粒的比例、质粒DNA的大小及构型、脂质体/DNA复合物的正负电荷比例和大小等。
  
  影响因素:
  
  1、细胞所处的周期
  
  细胞转染是一个多步骤、复杂的过程,包括细胞摄取、胞内转运和核孔转运。目前普遍认为抑制DNA释放的因素以及DNA进入细胞核的干扰因素,均对阳性脂质体介导基因转染产生重要影响。细胞在有丝分裂时,外源性DNA更容易被细胞核摄取。
  
  由此认为,DNA进入细胞核的一个主要机制是依赖于细胞分裂时的有丝分裂被动进入胞核。此外,脂质体的转染效率还跟转染时间、转染细胞的类型、转染细胞的生长状态及融合程度等因素有关。
  
  2、质粒DNA的大小及构型
  
  有相关研究把阳离子脂质材料作为基因载体,并将3种构型(超螺旋、开环和线型)的质粒DNA分别转染Vero细胞,结果发现超螺旋质粒DNA的转染效率高。
  
  此外,也有实验表明小于100bp的DNA片段可以在细胞质中自由移动。然而随着DNA片段的增大,其在细胞质中的迁移能力也随之降低。这是由于核孔对于进入细胞核的DNA有大小限制的作用。
  
  3、脂质体/DNA复合物的正负电荷比例和大小
  
  脂质体/DNA复合物中两者的正负电荷比例是影响基因转染效率的重要因素。其中的一个重要原因是,两者所带电荷比例可直接影响复合物的粒径,而当复合物的直径尺寸在0.4-1.4um范围内时,具有较高的转染效率。
  
  以上是影响阳离子脂质材料转染效率的几个常见的因素,在这些影响因素中,对无血清细胞培养基的开发和利用无疑是提高细胞转染效率的一条重要途径。
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